ECL Western blot substratları: HRP katalizli luminol-peroksit reaksiyonu ile yüksek hassasiyetli protein tespiti. Substrat türleri, kullanım ipuçları ve avantajları EKA Biolab’da – kaliteli tedarik.
Enhanced Chemiluminescence (ECL), Western blot’ta en hassas non-radyoaktif tespit yöntemidir. HRP (horseradish peroxidase) konjugeli sekonder antikorla çalışır. Luminol tabanlı substrat ve hidrojen peroksit eklenir; HRP kataliziyle excited ara ürünler oluşur, 450 nm mavi ışık yayar.
Nasıl çalışır: Primer antikor hedef proteine bağlanır, HRP’li sekonder bağlanır. Substrat eklenince enzim-substrat reaksiyonu ışık üretir. Işık X-ray film veya CCD kamerayla yakalanır. ECL’nin “enhanced” kısmı, enhancer (fenol türevleri) sayesinde sinyal süresi uzar (dakikalarca).
Substrat türleri: Standart ECL (picogram hassasiyet), ultra hassas (femtogram), uzun süreli sinyal verenler. Thermo Fisher, Abcam, Bio-Rad gibi markalar farklı yoğunluk seçenekleri sunar.
Avantajları: Yüksek hassasiyet, geniş dinamik aralık, düşük arka plan, ucuz. Dezavantajları: Sinyal zamanla azalır, birden fazla exposure gerekebilir.
Bir yanıt yazın